RIPA裂解液(組織/細(xì)胞)

【產(chǎn)品規(guī)格】 ：20ml /100ml

【儲存條件】 ：RIPA裂解液4℃保存，PMSF -20℃保存

【有效期】 ：12個月

【產(chǎn)品簡介】 ：

RIPA裂解液是一種主要用于從動物組織和動物細(xì)胞中抽取的可溶性蛋白的試劑。

RIPA 組織/細(xì)胞裂解液是利用表面活性劑等來裂解細(xì)胞膜（包括核膜）。本試劑提取的蛋白為可溶性總蛋白。

本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗用，不做其它用途！

【使用說明】 ：

如發(fā)現(xiàn)RIPA有沉淀，請放室溫半小時或者常溫水浴使沉淀溶解。

根據(jù)使用量，取每1mL RIPA加入10uL PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM，混勻備用（PMSF現(xiàn)用現(xiàn)加）。

1、樣品前處理：

a)對于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。

b)對于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250uL裂解液的比例加入裂解液，用手指輕彈懸浮細(xì)胞以充分裂解。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50-100萬細(xì)胞/管，然后再裂解。

c)對于組織樣品：把組織剪切成細(xì)小的碎片。按照每20mg組織加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量) 。用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

2、后處理：

將裂解后的樣品10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的蛋白濃度測定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。

【注意事項】 ：

本試劑為強(qiáng)烈型裂解液，可以提取核蛋白，但在提取核蛋白的同時，也會將基因組一并釋放出來，若細(xì)胞量多會造成細(xì)胞裂解液粘稠：此時可以直接加入蛋白上樣緩沖液，煮沸再離心，離心后直接上樣電泳；若想測定濃度，可加入少量 SDS（1%），煮沸后離心測濃度。本系列蛋白提取試劑所提取的蛋白由于含有去污劑，所以不適合使用Bradford 蛋白濃度測定試劑盒，請選擇BCA法或者Lowry法檢測蛋白濃度。

如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散粘稠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗。

RIPA裂解液(組織/細(xì)胞)