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谷氨酰胺合成酶檢測試劑盒檢測速度就是快!
更新時間:2018-07-04   點擊次數(shù):1570次

谷氨酰胺合成酶檢測試劑盒檢測速度就是快!

谷氮酰胺合成酶,是衡量植物氮素同化水平的一項重要生理指標(biāo)。谷氨酰胺這種氨基酸,不僅被細(xì)胞用來合成蛋白質(zhì),也是用來運輸氨的。自由的銨離子對生物有毒性,在血液中不能太多,但是一些生物過程又會產(chǎn)生游離的銨離子;所以就讓谷氨酰胺來運輸這些銨離子。當(dāng)細(xì)胞需要運輸多余的銨離子的時候,就用銨離子和谷氨酸來合成谷氨酰胺,同時消耗ATP。谷氨酰胺合成酶催化的就是這個反應(yīng)。這個反應(yīng)分成兩步進(jìn)行,酶先讓ATP和谷氨酸反應(yīng),生成γ-谷氨酰;接著銨離子上來,替換掉。在高等植物的研究中,GS也常被定義為植物氨同化所必需的酶。人谷氨酰胺合成酶叫做hGS。

測定原理
GS 在ATP 和Mg2+存在下,催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺;谷氨酰胺進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為γ─
谷氨酰基異羥肟酸,在酸性條件下與鐵形成紅色的絡(luò)合物;該絡(luò)合物在540nm 處有大吸
收峰,可用分光光度計測定。

所需的儀器和用品
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、
研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制
提取液:100mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:10mL×1 瓶,-20℃保存。
試劑二:10mL×1 瓶,-20℃保存。
試劑三:粉劑×2 瓶,-20℃保存。用時每瓶加入5mL 蒸餾水充分溶解備用,用不完的試劑仍
-20℃保存。
試劑四:15mL×1 瓶,4℃保存。

 

谷氨酰胺合成酶檢測試劑盒檢測速度就是快!

 

樣本測定的準(zhǔn)備
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量
(104 個):提取液體積(mL)為500~1000:1 的比例(建議500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL 提
取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30 次);
8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10 的比例(建議稱取約0.1g 組織,
加入1mL 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。

產(chǎn)品優(yōu)點如下:

1、快速簡便:操作時間短,48-50T,可測40例樣本左右,96-100T,可測80例樣本左右;
2、取樣量微:常規(guī)操作取樣量50l, 酶標(biāo)儀操作僅需5l即可檢測,部分試劑盒取樣多少請;
3、穩(wěn)定性好:試劑盒2~8℃存放3個月有效;
4、再現(xiàn)性好:20倍稀釋線性仍然良好;
5、回收試驗: X =99%;
6、受外界影響因素小:干擾因素少,重復(fù)性強;
7、測試面廣:可測動物血清(漿)、組織、各種體液、灌流液、各種培養(yǎng)細(xì)胞以及細(xì)胞培養(yǎng)上清液等,部分試劑盒適用于檢測植物,可以。

 

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